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細胞片制備是免疫熒光實驗的第一步
發布時間:2019-03-06 點擊次數:145次
   免疫熒光是根據抗原抗體反應的原理,先将已知的抗原或抗體标記上熒光素制成熒光标記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織内的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體複合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察标本,免疫熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而确定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。
 
  免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透(或稱為透化)、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。細胞片制備(通俗的說法是細胞爬片)是免疫熒光實驗的第一步,細胞片的質量對實驗的成敗至關重要,原因很簡單,如果發生細胞掉片,一切都無從談起。這一步關鍵的是玻片的處理以及細胞的活力,有人根據成功經驗總結出許多有益的細節或小竅門,非常值得借鑒。固定和通透步驟最重要的是根據所研究抗原的性質選擇适當的固定方法,合适的固定劑和固定程序對于獲得好的實驗結果是非常重要的。
 
  免疫熒光中的封閉和抗體孵育與其他方法(如ELISA或Western Blot)中的相同步驟是類似的,最重要的區别在于免疫熒光實驗中要用到熒光抗體,因此必須謹記避光操作,此外,抗體濃度的選擇可能更加關鍵。最後需要注意的是,标記好熒光的細胞片應盡早觀察,或者用封片劑封片後在4℃或-20℃避光保存,以免因标記蛋白解離或熒光減弱而影響實驗結果。

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