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人肝癌氟尿嘧啶耐藥株細胞複蘇操作詳細步驟
發布時間:2018-01-19 點擊次數:700次
   人肝癌氟尿嘧啶耐藥株屬于貼壁型細胞,如果漂浮的死細胞多,說明細胞有很多老化的,建議每次傳代的時候,在用胰酶消化之前,zui好用PBS将細胞漂洗一遍,胰酶消化的時間要把握好,37℃2-3min即可,及時終止反應,否則胰酶消化過度對細胞損傷較大,也會有很多死細胞出現的;吹打細胞的動作要輕柔。
  
  待細胞生長狀态良好時,可進行人肝癌氟尿嘧啶耐藥株細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基後加入少量胰酶,細胞變圓脫落後,加入約1ml含血清的培養基後加入凍存管中,再添加10%DMSO後進行凍存。懸浮細胞凍存時,應将細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液,加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO後進行凍存。
  
  人肝癌氟尿嘧啶耐藥株細胞複蘇操作步驟:
  
  1.将冷凍管迅速由液氮轉入到37℃水浴中,冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染,不定時攪拌加速解凍;
  
  2.當細胞完全解凍後,用含70%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒;
  
  3.将解凍後細胞轉移到含4℃預平衡培養液的試管中;
  
  4.細胞懸液在4℃下200磄離心10分鐘;
  
  5.棄上清,将細胞重新懸浮在新鮮培養液中;
  
  6.将細胞轉移到細胞培養瓶,CO2孵箱中培養;
  
  7.是用倒置顯微鏡檢查細胞存活率以及細胞密度,如果細胞密度過高,用培養液稀釋至适宜濃度。

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