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細胞培養中常見的污染以及解決方案

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詳細介紹
  
  
  細胞培養中常見的污染情況總結如下
  
  常見的污染如下:
  
  1、細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。
  
  仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象!
  
  可在培養液中加相應的抗生素處理
  
  2、黴菌:培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之後,細胞的活力狀态變差,
  
  用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盤裡也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止黴菌污染。
  
  CO2孵箱被黴菌污染後,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔闆,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱内一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散後,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。
  
  其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。
  
  預防黴菌污染,可在培養基裡加3u/ml的兩性黴素或制黴菌素或放線菌素D或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,制黴菌素或放線菌素D或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,将環境徹底消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統污染,檢查一下培養基和器材,如果隻是個别污染,可能是操作問題,就要注意操作
  
  3、支原體:黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國内血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後,細胞病變不很明顯,隻是慢慢死去。
  
  用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養,無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/mlTylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話,建議用8ug/ml的濃度。
  
  4、黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲遊來遊去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀态良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顔色、透明度無明顯變化,可在同一批号的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀态不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之後會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種闆密度,以提高細胞的生存率。
  
  5、真菌:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,隻是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那麼容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
  
  6、原蟲:培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀态不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞争奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,隻有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環。
  
  污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等
  
  關于培養基的無菌狀況,取培養基至培養瓶中(不加細胞),37度試培養一段時間後觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。
  
  也可以在培養基中事先加入雙抗(硫酸鍊黴素和氨苄青黴素)。但雙抗有時會影響細胞的狀态,所以在做轉染、檢測細胞某項指标前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。
  
  1、孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱内的水應是三蒸水
  
  2、超淨台\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素
  
  3、超淨台的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能緻黴菌污染
  
  4、無菌室經甲醛熏蒸消毒後,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。

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