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細胞凋亡檢測的詳細介紹及操作注意事項
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  細胞凋亡檢測是用FITC标記的重組人AnnexinV來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。細胞凋亡檢測可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿内鈣離子依賴的磷脂結合蛋白,參與細胞内的信号轉導。但僅AnnexinV被報道可以調控一些PKC的活性。
  
  一、細胞凋亡檢測:
  
  AnnexinV選擇性結合磷脂酰絲氨酸。磷脂酰絲氨酸主要分布在細胞膜内側,即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期,不同類型的細胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細胞表面,即細胞膜外側。磷脂酰絲氨酸暴露到細胞表面後會促進凝血和炎症反應。而AnnexinV和外翻到細胞表面的磷脂酰絲氨酸結合後可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎症反應活性。
  
  細胞凋亡檢測用帶有綠色熒光的熒光探針FITC标記的AnnexinV,即AnnexinV-FITC,就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。本試劑盒還提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)染色液,碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞,呈現紅色熒光。對于壞死細胞,由于細胞膜的完整性已經喪失,AnnexinV-FITC可以進入到細胞漿内,與位于細胞膜内側的磷脂酰絲氨酸結合,從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。
  
  二、細胞凋亡檢測注意事項:
  
  盡管經測試AnnexinV-FITC反複凍融5次對于其檢測效果無顯著影響,但為取得良好的使用效果,3-6個月内推薦4℃保存,并适當注意避免反複凍融。
  
  如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果。
  
  細胞凋亡檢測染色後宜盡快檢測,時間過長可能會導緻凋亡或壞死細胞的數量增加。
  
  如果細胞收集過程中使用了胰酶,細胞凋亡檢測需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解AnnexinV-FITC,導緻染色失敗。
  
  熒光物質均易發生淬滅,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
  
  用于流式細胞儀檢測時,如果發現AnnexinV-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞,并且通過調整相關設置和參數也無法改善,可以用PBS将AnnexinV-FITC稀釋3-10倍後再進行檢測,這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
  
  需自備PBS。
  
  本産品于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅内。
  
  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
  
  

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